| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 57-1 | ||||
Resumo:Candida albicans é um fungo patogênico comumente encontrado na microbiota humana, podendo causar uma grande variedade de infecções, desde superficiais, como candidíases oral e vaginal, até infecções sistêmicas graves em indivíduos imunocomprometidos. A capacidade deste fungo em se torna um patógeno oportunista se deve, em parte, aos seus genes de virulência. Os genes de virulência são responsáveis por conferir ao fungo C. albicans a capacidade de aderir, invadir e colonizar tecidos hospedeiros. Estudos têm demonstrado que diversas proteínas codificadas por esses genes estão envolvidas em diferentes etapas do processo infecciosos, como adesão à superfície celular do hospedeiro, formação de biofilme, penetração em tecidos e modulação de resposta imunológica do hospedeiro. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar genes de virulência em C. albicans de diferentes isolados clínicos. Onze cepas de C. albicans previamente isoladas de hemoculturas (2), microbiota oral de indivíduos saudáveis (2), isolados clínicos de indivíduos doentes (2), aspirado traqueal (1) e de pacientes portadores de HIV (4) foram analisadas pela técnica de PCR para presença dos genes ALS1, EFG1, LIP3, PLB1 e SAP1, cepa padrão ATCC 90028 foi utilizada como referência. Cada cepa foi cultivada em caldo BHI (Himedia®, Mumbai, Índia) e incubadas a 37°C/24h. Após o crescimento, cerca de 2mL foram transferidos para tubo microcentrifuga e submetida a extração do DNA (FENOL:CLOROFÓRMIO:ÁLCOOLISOAMÍLICO) utilizando beads de vidro. O DNA fúngico foi quantificado em espectrofotômetro (Amersham Biosciences GeneQuant Pro) e analisado a integridade do material genético em eletroforese em gel de agarose a 1%, após reveladas em transiluminador (EnduroTM GDS Touch). A reação de PCR foi realizada em Termociclador MiniAmp Thermal Cyclers (ThermoFisher), para o preparo utilizou-se o DNA fúngico, Kit de reação de PCR 2x Class Five Master Mix (Class Five Enzymes) e os Pares de Primers (Forward-Reverse) de amplificação dos genes de virulência fornecidos pela Ludwig Biotecnologia. Cada reação foi estabelecida a partir do rendimento do DNA obtido, consistindo o volume restante de água ultrapura. Os parâmetros de amplificação dos genes foram definidos de acordo com o fabricante dos primers, sendo para ALS1, EFG1 e LIP3, consistiram de 30 ciclos com desnaturação inicial a 94ºC por 4 minutos e 30 segundos, anelamento a 50ºC por 30 segundos e extensão a 72ºC por 1 minuto, e uma extensão final a 72ºC por 6 minutos, para PLB1/SAP1 a temperatura de anelamento foi de 55ºC. Para verificar a amplificação desses genes foi realizada em gel agarose (1%), além de marcador molecular de 1 Kb (KASVI) para verificar o tamanho dos amplicons. Os resultados mostraram detectável todos os genes buscados para a cepa ATCC. Os genes PLB1 e SAP1 apresentaram-se presentes em todos os isolados clínicos analisados, para o gene EFG1, apenas um isolado de um paciente com HIV não foi detectável. O gene LIP3 não foi detectável em nenhuma cepa oriunda da boca, além de dois isolados de pacientes com HIV. O gene ALS1 foi observado em duas cepas oriundas de pacientes HIV e os dois isolados clínicos. Esses resultados sugerem que esses genes podem desempenhar um papel importante na virulência de C. albicans, principalmente em pacientes com HIV e indivíduos acometidos por esse fungo. Palavras-chave: Candida albicans, Patogenicidade, Perfil de Virulência Agência de fomento:Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |||||